【仪器网 时事聚焦】2020年12月初，法国农业部发表声明中，法国国家卫生安全署(ANSES)参考实验室确认，该国西南部一家养殖场有6000只鸭子感染H5N8型病毒，并发现大量鸭子迅速死亡。2021年1月6日，法国农业部后续通报，该国朗德省(Landes)养禽场发生22起家禽H5N8亚型高致病性禽流感疫情，5121只家鸭和珍珠鸡感染，274只死亡，2.5万只被扑杀。
 

　　近几年，H5N8型病毒已先后在欧洲以及日本、韩国、中国台湾等多个国家和地区均发生过规模化爆发，引发了多方关切。
 

　　为保护我国畜牧业安全，加强高致病性禽流感的诊断技术，确保第一时间发现疫情，做到可防可控。近日，国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会正式发布《高致病性禽流感诊断技术》(G/B T 18936—2020)国家标准，该标准由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中华人民共和国北京海关、中国动物卫生与流行病学中心等单位负责起草。
 

　　标准规定了高致病性禽流感临床诊断，样品采集、保存与运输，病毒分离与鉴定，血凝和血凝抑制剂试验，禽流感病毒RT-PCR试验和禽流感病毒荧光RT-PCR试验的技术要求。
 

　　本标准将代替《高致病性禽流感诊断技术》(G/B T 18936—2003)标准，与旧标准相比，新标准在技术方面出现几点变化：一是增加了禽流感病毒RT-PCR试验； 二是增加了禽流感病毒实时荧光RT-PCR试验；三是删除了琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验；四是删除了间接酶联免疫吸附试验(ELISA)。
 

　　此次新增的禽流感病毒RT-PCR试验和荧光RT-PCR试验主要适用于检测禽组织、分泌物、排泄物等物质中的禽流感病毒核酸。
 

　　目前 PCR 技术只能扩增 DNA 模板，对 RNA 模板不能直接扩增。 mRNA反转录生成的 cDNA 可作为 PCR 的模板进行扩增，这种在 mRNA 反转录后进行的 PCR 扩增称为 RT-PCR 。 其特点是杂交灵敏度高，对 RNA 的质量要求较低，操作简便。目前该技术广泛应用于分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统等科研中。
 

　　而实时荧光RT-PCR(荧光定量聚合酶链式反应)指的是在PCR进行的同时，对其过程进行实时监测的能力，数据可在PCR扩增过程中进行收集，而非在PCR结束之后，反应以循环中首次检测到目标扩增的时间点为特征，而非在一定循环数后目标分子累计的扩增量。目标核酸的起始拷贝数越高，则会越快观察到荧光的显著增加。相反，终点法检测(也称 “读板检测”)测量的是PCR循环结束时累计的PCR产物量。
 

　　在仪器设备方面，新标准对适用仪器PCR扩增仪及配套反应管、高速台式冷冻离心机、生物安全柜、微量移液、荧光PCR仪等的配备要求及操作规范做了清晰的介绍。
 

　　标准是科学、技术及实验经验的总结。每一项标准的出台都是因时因需而生，标准的制定为某个领域在一定范围内达到秩序起到良好的规范作用。时隔18年，《高致病性禽流感诊断技术》(G/B T 18936—2020)国家标准的发布，对于高致病禽流感病毒的检测工作具有重要的技术指导意义。